[ View menu ]

Удаление формалинового осадка

Формалиновый осадок может присутствовать в тканях после фиксации в простом формалине (с кислой pH). Он коричневый, обычно внеклеточный, однако может присутствовать на макрофагах. Это коричневый, гранулярный, устойчивый депозит, отмечаемый внутри и внеклеточно в тканях, которые были фиксированы простым раствором формалина.Формалиновый осадок известен как кислый гематин формальдегида, так как образуется из гемоглобина под действием формальдегида в кислой среде. В связи с тем, что он образуется из гемоглобина, он часто наблюдается в кусочках с большим количеством крови, где простой формалин может привести в его образованию за довольно короткий период. Также имеется тенденция у образованию формалинового пигмента в тканях при длительном хранении в формалине, если раствор формалина регулярно не заменяется на свежий.

Образование данного артефакта может быть устранено в большинстве случаев использованием в качестве фиксатора нейтрального забуференного формалина. Нейтральный или слабо щелочной формалин может эффективно остановить его образование.

В малых количествах пигмент не мешает исследованию, но в большом - затрудняет.

Формалиновый осадок может быть удален из срезов:

А) с помощью спиртового раствора аммония:

Состав реагента:

1. 95% этанол - 50 мл;

2. Концентрированный гидроксид аммония (28%) - 15 мл.

Реактивы смешиваются перед использованием.

Методика:

1. Депарафинировать срезы;

2. Поместить в спиртовой раствор аммония (до 1 часа);

3. Тщательно промыть водой (желательно проточной);

4. Окрашивать по обычным методикам (в том числе гематоксилином и эозином).

Литература:
1. Cook H C, Manual of Histological Demonstration Techniques. P. 243. Bancroft JD & Stevens, Theory and Practice of Histological Techniques, 2nd Edition. p. 69.

Б) с помощью сатурированного спиртового раствора пикриновой кислоты

Состав реагента:

1. Абсолютный этанол;

2. Пикриновая кислота.

Методика:

1. Депарафинировать срезы ксилолом, провести их через спирты до воды.

2. Поместить срезы в сатурированный раствор пикриновой кислоты на несколько минут (до 1 часа);

3. Для обесцвечивания срезов от окраски пикриновой кислотой использовать сатурированный водный раствор крабоната лития;

4. Хорошо промыть водой;

5. Окрашивать обычными методами.

Литература:
1. Drury, R.A.B. and Wallington, E.A., (1980) Carleton’s histological technique Ed. 5. Oxford University Press, Oxford, UK.
2. Kiernan. J.A., (1999) Histological and histochemical methods: Theory and practice, d.3 Butterworth Heinemann, Oxford, UK.

В) с помощью 1% содового раствора на абсолютном этаноле. Однако этот метод приводит к отслоению срезов от предметного стекла. Поэтому он на практике не используется.

20 q. 0.086 s.