Проводка в изопропаноле
Проводка приспособлена нами к карусельному процессору фирмы Leica ТР1020, которым мы с удовольствием пользуемся уже несколько лет. Возможно, можно и на других или вручную.
Станция | Реагент | Экспозиция |
1 | 50%-ный водный раствор изопропилового спирта | 1 час. |
2 | Абсолютированный изопропанол | 30 мин. |
3 | Абсолютированный изопропанол | 30 мин. |
4 | Абсолютированный изопропанол | 30 мин. |
5 | Абсолютированный изопропанол | 1 час. |
6 | Абсолютированный изопропанол | 1 час. |
7 | Абсолютированный изопропанол | 2 час. |
8 | Абсолютированный изопропанол | 3 час. |
9 | Абсолютированный изопропанол | 3 час. |
10 | Парафин | 1 час. |
11 | Парафин | 3 час. |
12 | Парафин | 4 час. |
Итого | 20 час.30 мин. |
Примечание: использовать только абсолютированный 99,7° и выше изопропанол.
Также хорош (даже несколько лучше) химически чистый изопропанол (ХЧ). Другие не годятся, снижение градусности резко - катастрофически снижает качество препаратов. Никаких добавок к спирту мы не применяли.
Данный вариант проводки позволяет провести в течение суток в 1-ной корзине до 400 (!) кусочков органов (секционный материал - т.е. крупных по площади, но толщиной до 3 мм - !). Вакуумник включать не требуется. В этом варианте проводки легко применима (при необходимости) двойная загрузка, но это увеличивает время, т.к. в парафинах материал должен находиться не менее 8 часов, причем не менее 3,5 часов в чистых, следовательно на каждой станции - по 3,5 часа. Т.о. вся проводка - почти 2 дня.
Биопсии проходят быстрее.
Увеличение времени пребывания в спиртах свыше указанного не улучшает и не ухудшает качества препаратов. Критично время пребывания в парафине - его уменьшение существенно ухудшает пропитывание кусочков и средина вываливается. Это время при возможности можно увеличивать.
При замене спиртов - на 1 шаг назад. Одновременно заменяется 50% изопропанол (смесь с водой готовится из чистого спирта !). Менять - по мере загрязнения. Но после проводки более 300 кусочков - обязательно.
Мы использовали биовитрумовский Histomix.
Данная проводка по качеству выше ксилольной и ацетоновой, почти аналогичная хлороформенной, но имеется существенная экономия на реагентах, так как исключается промежуточная среда.
Не надо бояться напрямую опускать кусочки из изопропанола в парафин(!), также как из хлороформа или ксилола, минуя «каши».